動物源性食品中喹諾酮類藥物殘留LC-MS/MS分析方法
背景
喹諾酮類(Quinolones, QNs)是人工合成的一類抗菌藥物,因其具有抗菌譜廣、高效、低毒、組織穿透力強、價格低廉等特點,已成為食品動物飼養(yǎng)和水產(chǎn)養(yǎng)殖中最重要的抗感染藥物之一,但由于細菌對喹諾酮類藥物耐藥性的產(chǎn)生和某些喹諾酮類藥物的潛在致癌作用,其殘留問題已引起廣泛關注。
2003 年我國的鰻魚產(chǎn)品就曾因氟喹諾酮類藥物殘留問題出口日本受阻。目前,包括我國在內(nèi)的許多國家和地區(qū)都對喹諾酮類藥物的使用范圍和最大殘留限量做出規(guī)定。歐盟規(guī)定動物肌肉等組織中恩諾沙星等的MRLs 為0.01 ~ 1.9 mg/kg;美國禁止在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中使用QNs;日本對進口生鰻魚及其制品的環(huán)丙沙星等殘留限量控制在檢測限的0.05 mg/kg。中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第2292 號,自2016 年12 月31 日起,停止經(jīng)營、使用用于食品動物的洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4 種原料藥的各種鹽、酯及其各種制劑。本文根據(jù)《GB/T20366-2006 動物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的測定液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法》,采用PerkinElmer QSight LCMSMS 建立動物源食品中喹諾酮類藥物殘留的解決方案。
樣品前處理方法
提取
稱取5.0 g 試樣,置于50 mL 聚四氟乙烯離心管中,加入20 mL 甲酸- 乙腈溶液(1:49),均質(zhì)1 min,以4000 r/min 離心5 min。上清液移入另一個50 mL聚四氟乙烯離心管中。將離心殘渣用20mL 甲酸- 乙腈溶液再提取一次,合并上清液。
凈化
將上清液轉(zhuǎn)移至125 mL 分液漏斗中,加入25 mL乙腈飽和的正己烷,振搖2 min,將下層溶液轉(zhuǎn)移至100 mL 棕色雞心瓶中,于40 ℃水浴中旋蒸至近干,氮吹至干。準確加入1.0 mL 甲酸- 乙腈溶液溶解殘渣,渦流混勻后,過濾至樣品瓶中,供LC-MS/MS 測定。
LC-MS/MS 方法
液相色譜參數(shù)
色譜柱:Brownlee SPP C18,100 mm*2.1 mm,2.7μm (貨號:N9308404)
柱溫:35 ℃
流動相:A:乙腈,B:水(含0.1 % 甲酸,2.0 mM 乙酸銨)
流速:0.4 mL/min
運行時間:10 min
梯度洗脫:洗脫程序見表1:
質(zhì)譜參數(shù)
以下參數(shù)以PerkinElmerQSight 200 系列為例,喹諾酮類化合物質(zhì)譜參數(shù)見表2。
離子源質(zhì)譜參數(shù):
離子源模式:電噴霧離子源,正離子模式(ESI+)
反吹氣:75
霧化氣:220
離子源溫度:450 ℃
離子源噴霧電壓:5000 V
實驗結果
各組分的色譜圖如圖1 所示,各個化合物均獲得良好的色譜分離
十六種喹諾酮類化合物的標準曲線線性見表3,氟甲喹標準工作曲線的濃度梯度為:0.001,0.002,0.005,0.1,0.2,0.5,1,2,5,10 ng/mL。圖2 為氟甲喹的標準曲線圖。
其余喹諾酮目標化合物的標準曲線在0.01-50 ng/mL,依次為0.01,0.02,0.05,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0,20.0,50.0 ng/mL。其中,諾氟沙星和環(huán)丙沙星為0.05-50 ng/mL,萘啶酸和氟甲喹為0.001-10 ng/mL。標準曲線范圍內(nèi)具有良好的線性(R2> 0.994);采用魚肉基質(zhì)作為加標樣品,平行6 個樣品測試方法的回收率和方法重現(xiàn)性,詳細結果請見表4。從表4 可以看到,在加標濃度為2 ng/mL 下,回收率為92.25-105.87 %,方法重現(xiàn)性為1.53-4.78%。最低定量限為0.0002-0.01μg/kg,完全符合殘留檢測要求。
結論
本方法完全滿足對GB/T 20366-2006 動物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的檢測要求(標準里的最低限量為1.0μg/kg),適用于喹諾酮及其類似物的日常檢測。PerkinElmerQSight 210TM 系統(tǒng)完全滿足動物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的日常檢測工作。該質(zhì)譜系統(tǒng)離子源具有自清潔功能以及質(zhì)譜接口HSID 熱源去溶劑技術,提高儀器抗污染能力,從而獲得更低的噪音,更低的檢測限,從容應對復雜基質(zhì)的食品安全檢測。
參考文獻
1. GB/T 20366-2006 動物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法
色譜柱及標準品訂購信息
PerkinElmer SPP 系列色譜柱訂購信息:色譜柱采購直線:
021-60645658,021-60645659
電子郵件:consumable.china@perkinelmer.com。
標準品訂購信息:
1ST9243-100M | 16 種喹諾酮類混標溶液,100ppm |
組分 | |
產(chǎn)品號 | 中文 | 英文 | CAS# | MF |
1ST4100 | 達氟沙星 | Danofloxacin | 112398-08-0 | C19H20FN3O3 |
1ST4107 | 恩諾沙星 | Enrofloxacin | 93106-60-6 | C19H22FN3O3 |
1ST5703 | 環(huán)丙沙星 | Ciprofloxacin | 85721-33-1 | C17H18FN3O3 |
1ST5714 | 依諾沙星 | Enoxacin | 74011-58-8 | C15H17FN4O3 |
1ST5719 | 氟羅沙星 | Fleroxacin | 79660-72-3 | C17H18F3N3O3 |
1ST5735 | 萘啶酸 | Nalidixic acid | 389-08-2 | C12H12N2O3 |
1ST5738 | 諾氟沙星 | Norfloxacin | 70458-96-7 | C16H18FN3O3 |
1ST5740 | 氧氟沙星 | Ofloxacin | 82419-36-1 | C18H20FN3O4 |
1ST5743 | 奧比沙星 | Orbifloxacin | 113617-63-3 | C19H20F3N3O3 |
1ST5745 | 惡喹酸 | Oxolinic acid | 14698-29-4 | C13H11NO5 |
1ST5753 | 司帕沙星 | Sparfloxacin | 110871-86-8 | C19H22F2N4O3 |
1ST5756 | 培氟沙星 | Pefloxacin | 70458-92-3 | C17H20FN3O3 |
1ST5757 | 沙拉沙星 | Sarafloxacin | 98105-99-8 | C20H17F2N3O3 |
1ST5758 | 雙氟沙星 | Difloxacin | 98106-17-3 | C21H19F2N3O3 |
1ST5761 | 氟甲喹 | Flumequine | 42835-25-6 | C14H12FNO3 |
1ST5759 | 洛美沙星 | Lomefloxacin | 98079-51-7 | C17H19F2N3O3 |